肿瘤蛋白的提取 蛋白质类肿瘤相关物质测定

肿瘤治疗 2025-08-08 12:31肿瘤治疗www.zhongliuw.cn

一、蛋白质类肿瘤标志物概述

蛋白质类肿瘤标志物是指由肿瘤细胞产生或机体对肿瘤反应产生的特殊蛋白质,包括酶、蛋白类/肽类激素以及其他特定蛋白质。这些标志物在肿瘤诊断、疗效评估和预后监测中具有重要价值,但需注意它们通常不能单独用于确诊肿瘤类型和严重程度,需要结合其他检查。

常见蛋白质类肿瘤标志物包括:

  • 癌胚抗原(CEA):与消化道癌症和肺癌相关
  • 甲胎蛋白(AFP):肝癌和胚胎性肿瘤标志
  • CA125:卵巢癌相关标志物
  • CA19-9:癌和胆管癌标志
  • PSA:前列腺特异性抗原
  • CYFRA21-1:非小细胞肺癌标志
  • 二、肿瘤蛋白提取方法

    (一) 肿瘤组织蛋白提取步骤

    1. 前期准备

  • 配置含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的裂解液
  • 预冷离心机至4℃
  • 2. 组织处理

  • 取30-100mg肿瘤组织,用PBS冲洗后吸干水分
  • 加入裂解液(推荐比例:100mg组织/1ml裂解液)
  • 加入研磨,使用研磨仪研磨至组织完全破碎
  • 3. 裂解与离心

  • 冰上裂解30分钟
  • 4℃下15000rpm离心10-15分钟
  • 4. 保存

  • 收集上清液,分装后-80℃长期保存
  • (二) 注意事项

  • 全程冰上操作,防止蛋白降解
  • 避免组织反复冻融
  • 根据目标蛋白特性选择合适裂解液(如膜蛋白需NP40浓度较高的裂解液)
  • 提前评估目的蛋白丰度,计算所需组织量
  • 三、蛋白质类肿瘤相关物质检测方法

    (一) 常用检测技术

    1. 血清学检测

  • 采集空腹血2ml分离血清,-20℃保存
  • 常用ELISA法检测AFP、CA199及CEA等标志物
  • 生物芯片检测仪分析结果
  • 2. 免疫组化(IHC)

  • 检测固定组织中目标蛋白的原始分布
  • 在临床病理诊断中具有关键作用
  • (二) 检测注意事项

  • 需空腹采血,避免高脂饮食影响结果
  • 注意样本不被污染并及时送检
  • 检测结果需结合临床表现和其他检查综合评估
  • 部分标志物可能受非肿瘤性疾病影响,存在假阳性可能
  • 四、临床应用价值与局限

    蛋白质类肿瘤标志物检测在临床上主要用于:

  • 辅助诊断特定肿瘤类型
  • 监测治疗效果和病情进展
  • 预后评估和复发监测
  • 但需注意其局限性:

  • 单一标志物特异性有限,需联合检测
  • 不能替代影像学检查和组织活检
  • 部分良性疾病也可能导致标志物升高
  • 对于胃癌早筛等特定应用场景,血清学免疫检测(如"胃功能四项")因其方便快捷、成本较低等特点,在临床实践中仍占主要地位。

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