1. 形态学鉴定
光学显微镜观察：通过倒置显微镜直接观察细胞形态，如上皮细胞呈多边形、成纤维细胞呈长梭形等特征。肿瘤细胞通常表现出大小不等、核质比例异常及重叠生长等特点。
电子显微镜检查：观察超微结构，如张力原纤维、桥粒（上皮癌）或分泌颗粒（腺癌）等特异性结构。
2. 细胞核型分析
染色体检查：通过秋水仙素处理获取中期分裂象细胞，分析染色体数量、分组及分带特征，判断细胞种属来源和恶性程度。肿瘤细胞常表现为非整倍体或标志性染色体异常。
3. 分子生物学检测
基因测序：通过二代测序（NGS）分析肿瘤细胞系的基因突变、融合或扩增情况，明确其分子特征。
免疫组化与甲基化检测：利用特定抗体标记或甲基化状态分析，辅助确定细胞分化方向和来源。
4. 功能实验验证
异种移植：将细胞接种至免疫缺陷动物（如裸鼠），观察成瘤能力及病理特征，验证其恶性表型。
生长特性分析：包括群体倍增时间、集落形成率等，肿瘤细胞通常表现出无限增殖能力。
5. 数据库比对
参考权威数据库（如GCO、OncoKB）中的肿瘤细胞系信息，比对基因表达谱或突变谱以确认来源。
规范与标准
人源肿瘤细胞系的建立需遵循技术规范（如DB4403/T 122-2020），记录患者临床信息、组织病理诊断及培养条件，确保来源可追溯。
综上，肿瘤细胞系来源的鉴定需综合形态、遗传、分子及功能多维度数据，并依托标准化流程和数据库验证。
