超滤离心管使用方法

一、预处理操作简述

对于新超滤管，加入超纯水完全浸没滤膜后，需要进行冰浴或冰箱预冷，时间约为5至10分钟。倒出水后，再次进行冰上预冷，时间持续约2至5分钟，此时即可准备加样。这一系列的预处理操作，旨在确保超滤管在使用前达到最佳的过滤状态。而对于旧超滤管，需要先倒出保存的乙醇溶液，并用纯水多次冲洗，确保无残留，随后进行冰浴预冷即可使用。

二、选择适当的超滤管参数

在选择超滤管时，需要关注其截留分子量（MWCO）。通常，选择目标分子量的三分之一作为截留膜的最佳选择。例如，若目标蛋白为35kDa，则应选择10kDa截留膜。还需根据样本体积选择合适的超滤管，确保小体积样本使用小容量超滤管，大体积则需要分批离心处理。

三、加样与离心细节介绍

在加样过程中，务必确保样本量不超过管顶白线，避免气泡的干扰。对于离心步骤，需配平后以特定的转速和时间进行离心。加速度应调至最低档，且全程需在4℃预冷的离心机中进行。中途还需观察浓缩液的状态，如出现沉淀或堵管现象，应及时调整离心条件。

四、样本收集方法详解

完成离心后，需要仔细收集样本。将内管倒置到新的外管中，并以适当的转速离心1至2分钟，以收集残留的浓缩液。外管中的滤液含有去除的小分子物质，根据实验需求决定其使用与否。

五、超滤管的清洗与保养要点

使用超滤管后，应立即用纯水多次冲洗，并用75%乙醇冲洗三次。对于易吸附蛋白的样本，可选择进行钝化处理，用1% BSA溶液浸泡1小时以减少非特异性吸附。长期保存时，需灌注75%乙醇并密封，避免膜干燥开裂。

六、操作注意事项

在使用超滤管过程中，需要注意漏管检测，确保无渗漏现象。要避免过度浓缩，保持最终体积在一定范围内，以防膜吸附导致样本损失。操作全程建议在冰上进行，以减少蛋白降解的风险。整个操作流程旨在帮助实验人员高效完成样本浓缩、脱盐及缓冲液置换等操作，同时延长超滤管的使用寿命。通过遵循这些步骤和注意事项，实验人员可以更好地利用超滤管进行样本处理，确保实验的准确性和可靠性。