首页 >> 肝癌 >>

接种肿瘤基质胶用法 基质胶matrigel做肿瘤

肝癌 2025-08-11 13:01肝癌症状www.zhongliuw.cn

基质胶是从Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠肉瘤中提取的可溶性基底膜制剂,主要成分包括层粘连蛋白、胶原蛋白I、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白,同时含有多种生长因子如TGF-β、EGF、IGF等。在肿瘤研究中,基质胶主要用于促进肿瘤细胞生长和建立动物模型。

一、基质胶在肿瘤实验中的主要应用

1. 皮下成瘤实验

  • 将肿瘤细胞与基质胶按1:1比例混合后注射到免疫缺陷小鼠皮下
  • 可提高成瘤率和生长速度,使某些单独注射不成瘤的细胞能够在体内成瘤
  • 适用于抗肿瘤药物疗效评价、肿瘤发生机制研究等
  • 2. 原位肿瘤模型

  • 利用基质胶的三维结构使肿瘤细胞在原位固定生长
  • 基质胶组分也是肿瘤形成不可或缺的营养成分
  • 3. 肿瘤侵袭实验

  • 通过Transwell小室建立体外模型,在上室铺Matrigel胶模拟基底膜屏障
  • 评估肿瘤细胞穿过基质膜的能力
  • 二、皮下成瘤实验操作步骤

    1. 细胞准备

  • 收集对数生长期的肿瘤细胞(如HepG2),密度达80-90%
  • 胰酶消化后制成细胞悬液,离心清洗,重悬至1×10个细胞/mL
  • 2. 基质胶处理

  • 从-20℃取出基质胶,4℃冰上过夜融化
  • 使用预冷枪头混匀,避免气泡产生
  • 3. 细胞与基质胶混合

  • 按1:1比例将细胞悬液与基质胶在4℃环境下混合
  • 终浓度调整为5×10个细胞/mL
  • 整个过程需在冰上操作,防止提前凝胶化
  • 4. 动物接种

  • 选择4-6周龄免疫缺陷小鼠(如裸鼠)
  • 在右肩处皮射200μL混合液,进针约1cm深
  • 接种过程尽量在半小时内完成
  • 5. 观察与取材

  • 1周至1个月可见肿瘤形成
  • 根据实验设计在肿瘤达到要求体积时取材
  • 三、关键注意事项

    1. 基质胶选择

  • 皮下成瘤推荐使用高浓度基质胶(16-26mg/mL)
  • 类器官培养推荐低生长因子无酚红型
  • 标准型适用于血管生成、侵袭实验等
  • 2. 操作要点

  • 所有接触基质胶的器皿和枪头必须预冷
  • 避免反复冻融,建议首次使用后分装保存
  • 稀释后应立即使用,最终浓度不应低于3mg/mL
  • 3. 常见问题解决

  • 荷瘤不成功可能因细胞状态差、小鼠周龄过大或免疫排斥
  • 推荐接种部位为腋下中后部皮下,成瘤率高
  • 肿瘤长起后消失可能与免疫系统激活有关
  • 四、其他肿瘤相关应用

    1. 血管生成实验

  • 评估肿瘤血管形成能力
  • HUVEC细胞可在基质胶上形成血管网络结构
  • 2. 类器官培养

  • 模拟肿瘤微环境的三维结构
  • 可用于肿瘤干细胞研究和药物筛选
  • 基质胶因其能模拟体内基底膜环境,已成为肿瘤研究中不可或缺的工具,正确选择和使用基质胶对实验成功至关重要。

    上一篇:肿瘤怎么防止长大_怎样防止肿瘤 下一篇:没有了

    Copyright@2015-2025 肿瘤网版板所有