肿瘤解离流式分析是一种结合组织解离技术与流式细胞术的方法，用于研究肿瘤微环境中的细胞组成和功能状态。以下是关键步骤和技术要点：
一、肿瘤组织解离
1. 解离试剂选择
推荐使用小鼠肿瘤解离试剂盒（如Tumor Dissociation Kit, mouse 130-096-730），配合Gentle MACS全自动加热组织处理器制备单细胞悬液。
新型解离试剂（如含透明质酸酶/DNA酶I的混合物）可避免细胞表面标记物（CD8、PD-1等）降解，提升下游流式检测准确性。
2. 机械与酶消化结合
组织需先机械解离为小块，再通过胶原酶/DNase消化，最后用70 μm筛网过滤去除细胞团块。
二、流式细胞术分析
1. 样本制备优化
磁性分选前建议用70 μm过滤器过滤细胞悬液，确保单细胞状态。
采用台盼蓝或死活染料评估细胞活性，避免死细胞干扰结果。
2. 抗体标记策略
通用白细胞标记物（如CD45）结合肿瘤特异性标志物（如EpCAM）可区分肿瘤细胞与免疫细胞。
多色流式可同时检测TILs的浸润模式（如CD3+CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞等）及其功能状态（PD-1、Tim-3等免疫检查点）。
3. 应用场景
肿瘤微环境研究：分析免疫细胞（如Tregs、树突状细胞）与肿瘤细胞的相互作用。
疗效评估：通过DNA含量分析或免疫分型监测化疗/免疫治疗响应。
CAR-T治疗监控：流式可追踪CAR-T细胞扩增、持久性及表型变化（如CD27+PD-1-亚群与疗效正相关）。
三、注意事项
样本新鲜度：scRNA-seq需快速解离新鲜组织，而snRNA-seq适用于冷冻样本。
数据整合：流式分选后可结合单细胞测序（如10X Genomics）深入细胞异质性。
该方法在肿瘤免疫治疗、耐药机制研究中具有重要价值，需根据实验目的优化解离和标记方案。
