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肿瘤全细胞系wb 肿瘤细胞群

肝癌 2025-07-23 16:56肝癌症状www.zhongliuw.cn

肿瘤细胞系WB实验流程

Western Blot(WB)实验是检测肿瘤细胞系中蛋白质表达的重要技术手段,以下是肿瘤全细胞系WB实验的关键步骤:

1. 样品制备

  • 细胞裂解:移除培养液后用PBS洗涤,加入含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液使细胞裂解
  • 蛋白收集:用细胞刮刀和移液枪收集细胞碎片及裂解液至离心管中,在冰上或4℃下裂解20分钟后,10rpm离心15分钟取上清液
  • 保存:上清液保存在-20℃冰箱中备用
  • 2. 蛋白含量测定

  • 使用BCA法稀释样品并测其浓度,需多次重复测定
  • 将样品置于冰上解冻,进行20倍稀释后使用562nm波长测定
  • 根据标准曲线计算蛋白浓度
  • 3. 电泳实验

  • 制备玻璃板与分离胶,插入梳子进行制胶
  • 放入电泳槽中,加入样品进行上样
  • 在100℃下加热15分钟,然后开始电泳,先使用60V,后转为120V直至完成
  • 4. 转膜操作

  • PVDF膜在无水乙醇中活化后放入转膜液中
  • 构建"三明治"结构(纤维棉、NC膜等)进行转膜
  • 使用250mA电流转膜2.5小时后检查转膜效果
  • 5. 抗体孵育与检测

  • 用5%脱脂奶粉的TBST溶液进行封闭2小时
  • 一抗4℃过夜孵育,二抗室温孵育1小时
  • TBST洗涤后使用ECL显影液进行曝光检测
  • 肿瘤细胞群的分类与特性

    肿瘤细胞群体根据增殖状态可分为三种主要类型:

    1. 增殖细胞群

  • 持续分裂,代谢活跃
  • 对放化疗敏感
  • 是肿瘤生长的主要动力来源
  • 2. 静止细胞群(G0期细胞)

  • 暂不分裂但保留增殖能力
  • 对放化疗不敏感
  • 可能成为肿瘤复发的根源
  • 3. 无增殖能力细胞群

  • 丧失分裂能力,最终衰老死亡
  • 对治疗无显著影响
  • 在肿瘤组织中占据一定比例
  • 肿瘤细胞系的科研应用

    肿瘤细胞系作为重要的研究工具,在肿瘤生物学研究中具有多方面应用价值:

    1. 药物筛选与耐药性研究

  • 用于高通量药物筛选,评估药物的细胞毒性和作用机制
  • 研究肿瘤细胞的耐药机制,如使用A549细胞系研究肺癌对顺铂的耐药性
  • 2. 基因功能和靶向治疗研究

  • 通过CRISPR-Cas9等技术在肿瘤细胞系中敲除或过表达特定基因
  • 研究基因功能,如在HCT116细胞系中敲除TP53基因研究其在结直肠癌中的作用
  • 3. 肿瘤免疫学研究

  • 研究免疫逃逸机制、检查点抑制剂的作用等
  • PD-L1高表达的细胞系可用于研究免疫检查点抑制剂的疗效
  • 4. 转移机制研究

  • 研究肿瘤细胞转移到特定器官(如大脑)的分子机制
  • 通过单细胞测序等技术分析转移性肿瘤细胞的特性
  • 肿瘤细胞系的局限性及新兴技术

    虽然肿瘤细胞系是重要的研究工具,但也存在一些局限性:

    1. 肿瘤异质性问题

  • 肿瘤细胞系在长期培养过程中可能会产生不同的亚克隆
  • 同一细胞系内部可能存在一定的异质性
  • 2. 微环境缺失

  • 体外培养的细胞系缺乏真实的肿瘤微环境(TME)
  • TME包括周围的血管、免疫细胞、成纤维细胞等,对肿瘤行为有重要影响
  • 3. 新兴替代技术

  • 循环肿瘤细胞(CTC)检测:直接从血液中检测肿瘤细胞,具有实时监测功能
  • 单细胞测序技术:解决肿瘤异质性问题,分析单个肿瘤细胞的基因组特征
  • 肿瘤内微生物群研究:微生物群在肿瘤转移中的新作用
  • 肿瘤全细胞系WB实验是研究肿瘤蛋白质表达的重要技术,需要严格控制实验条件以保证结果可靠性。肿瘤细胞群体具有高度异质性,可分为增殖、静止和无增殖能力三类,这对治疗策略制定有重要指导意义。肿瘤细胞系作为研究工具在药物筛选、基因功能研究和免疫学研究中发挥重要作用,但也存在异质性和微环境缺失等局限性。新兴技术如CTC检测、单细胞测序等为肿瘤研究提供了新的视角和工具。

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