肿瘤细胞系WB实验流程
Western Blot(WB)实验是检测肿瘤细胞系中蛋白质表达的重要技术手段，以下是肿瘤全细胞系WB实验的关键步骤：
1. 样品制备
细胞裂解：移除培养液后用PBS洗涤，加入含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液使细胞裂解
蛋白收集：用细胞刮刀和移液枪收集细胞碎片及裂解液至离心管中，在冰上或4℃下裂解20分钟后，10rpm离心15分钟取上清液
保存：上清液保存在-20℃冰箱中备用
2. 蛋白含量测定
使用BCA法稀释样品并测其浓度，需多次重复测定
将样品置于冰上解冻，进行20倍稀释后使用562nm波长测定
根据标准曲线计算蛋白浓度
3. 电泳实验
制备玻璃板与分离胶，插入梳子进行制胶
放入电泳槽中，加入样品进行上样
在100℃下加热15分钟，然后开始电泳，先使用60V，后转为120V直至完成
4. 转膜操作
PVDF膜在无水乙醇中活化后放入转膜液中
构建"三明治"结构(纤维棉、NC膜等)进行转膜
使用250mA电流转膜2.5小时后检查转膜效果
5. 抗体孵育与检测
用5%脱脂奶粉的TBST溶液进行封闭2小时
一抗4℃过夜孵育，二抗室温孵育1小时
TBST洗涤后使用ECL显影液进行曝光检测
肿瘤细胞群的分类与特性
肿瘤细胞群体根据增殖状态可分为三种主要类型：
1. 增殖细胞群
持续分裂，代谢活跃
对放化疗敏感
是肿瘤生长的主要动力来源
2. 静止细胞群(G0期细胞)
暂不分裂但保留增殖能力
对放化疗不敏感
可能成为肿瘤复发的根源
3. 无增殖能力细胞群
丧失分裂能力，最终衰老死亡
对治疗无显著影响
在肿瘤组织中占据一定比例
肿瘤细胞系的科研应用
肿瘤细胞系作为重要的研究工具，在肿瘤生物学研究中具有多方面应用价值：
1. 药物筛选与耐药性研究
用于高通量药物筛选，评估药物的细胞毒性和作用机制
研究肿瘤细胞的耐药机制，如使用A549细胞系研究肺癌对顺铂的耐药性
2. 基因功能和靶向治疗研究
通过CRISPR-Cas9等技术在肿瘤细胞系中敲除或过表达特定基因
研究基因功能，如在HCT116细胞系中敲除TP53基因研究其在结直肠癌中的作用
3. 肿瘤免疫学研究
研究免疫逃逸机制、检查点抑制剂的作用等
PD-L1高表达的细胞系可用于研究免疫检查点抑制剂的疗效
4. 转移机制研究
研究肿瘤细胞转移到特定器官(如大脑)的分子机制
通过单细胞测序等技术分析转移性肿瘤细胞的特性
肿瘤细胞系的局限性及新兴技术
虽然肿瘤细胞系是重要的研究工具，但也存在一些局限性：
1. 肿瘤异质性问题
肿瘤细胞系在长期培养过程中可能会产生不同的亚克隆
同一细胞系内部可能存在一定的异质性
2. 微环境缺失
体外培养的细胞系缺乏真实的肿瘤微环境(TME)
TME包括周围的血管、免疫细胞、成纤维细胞等，对肿瘤行为有重要影响
3. 新兴替代技术
循环肿瘤细胞(CTC)检测：直接从血液中检测肿瘤细胞，具有实时监测功能
单细胞测序技术：解决肿瘤异质性问题，分析单个肿瘤细胞的基因组特征
肿瘤内微生物群研究：微生物群在肿瘤转移中的新作用
肿瘤全细胞系WB实验是研究肿瘤蛋白质表达的重要技术，需要严格控制实验条件以保证结果可靠性。肿瘤细胞群体具有高度异质性，可分为增殖、静止和无增殖能力三类，这对治疗策略制定有重要指导意义。肿瘤细胞系作为研究工具在药物筛选、基因功能研究和免疫学研究中发挥重要作用，但也存在异质性和微环境缺失等局限性。新兴技术如CTC检测、单细胞测序等为肿瘤研究提供了新的视角和工具。
