体外抗肿瘤活性研究是通过体外实验评估药物或化合物对肿瘤细胞增殖、凋亡等生物学行为的影响，主要包括以下内容和方法：
一、常用实验模型
1. 细胞系选择
常用人源肿瘤细胞系（如A549肺癌、HepG2肝癌、HCT-116结肠癌等）进行实验，通过不同浓度药物处理，观察抑制作用。
鼠源细胞系（如S180肉瘤）也可用于初步筛选。
2. 体外培养条件
细胞在含血清培养基中培养，设置空白对照组和不同浓度药物处理组（通常含6个复孔）。
二、核心检测指标
1. 细胞增殖抑制
采用MTT法、CCK-8法或SRB法检测细胞活力，计算半数抑制浓度（IC50）。
例如艾叶提取物在100 μg/mL浓度下对A549细胞的抑制率达72.3%。
2. 细胞凋亡与周期
流式细胞术检测凋亡率（如糙皮侧耳糖蛋白使A549细胞凋亡率从5.2%升至38.6%）。
分析细胞周期阻滞（如紫杉醇脂质体诱导G2/M期阻滞）。
3. 迁移与侵袭能力
通过Transwell实验评估药物对肿瘤细胞转移的抑制作用。
三、作用机制研究
1. 分子靶点分析
检测信号通路（如PI3K/AKT、MAPK）或关键蛋白（如微管蛋白、PARP）的变化。
例如斑蝥素通过抑制PP2A激活JNK/NF-κB通路。
2. 成分特异性
中药提取物（如艾叶挥发油、黄酮类）可能通过破坏细胞膜或调节免疫发挥活性。
四、实验设计要点
浓度梯度：设置低、中、高剂量组（如10、50、100 μg/mL）。
时间点：通常观察24、48、72小时效应。
质量控制：需排除血性腹水等干扰因素。
五、局限性及后续方向
体外实验虽能快速筛选药物，但无法完全模拟体内微环境，需结合动物模型验证。例如斑蝥素在体外抑制癌细胞，却在体内加速肿瘤生长，提示机制复杂性。
